Test WESTERN BLOT 

Le test Western Blot est une technique utilisée pour détecter la présence d'anticorps dirigés, dans ce cas, contre la bactérie Borrelia burgdorferi, responsable de la maladie de Lyme, dans le sérum sanguin d'une personne.

 

Voici les principales étapes du fonctionnement de ce test :

 

PRELEVEMENT SANGUIN

Un échantillon sanguin est prélevé chez l'individu suspecté d'être atteint de la maladie de Lyme. Le sérum, (partie liquide du sang), est séparé du reste.

 

SEPARATION DES PROTEINES 

Les protéines récupérées dans le sérum sont soumises à une solution détergente qui permet de les dénaturer en leur conférant une charge négative. Posées sur du gel de polyacrylamide, les protéines vont migrer du pôle négatif au positif. 

Une fois la migration terminée, on observe des bandes de différentes tailles correspondant aux protéines. Cependant, plusieurs protéines peuvent avoir la même taille. 

 

TRANSFERT DES PROTEINES SUR UNE MEMBRANE

Le transfert s'effectue de façon similaire à la méthode de confection d'un sandwich. La membrane est mise en contact avec le gel, de chaque côté du papier Whatman (absorbant) et de l'éponge sont ajoutés. 

Anode (pôle positif) --> Eponge --> Papier Whatman --> Membrane --> Gel --> Papier Whatman --> Eponge --> Cathode (pôle négatif)

Cet ensemble est déposé dans une cuve ou une tension de 20V est exercée. Les protéines négatives vont alors migrer du gel à la membrane attirées par le pôle positif. 

 

BLOCAGE ET INCUBATION

La membrane est ensuite traitée avec une solution bloquante permettant de masquer les sites de fixations non spécifiques. Ensuite, la membrane est incubée avec le sérum du patient (anticorps primaire).

 

DETECTION DES ANTICORPS

Si le sérum contient des anticorps dirigés contre les protéines de Borrelia burgdorferi, ceux-ci se lient spécifiquement aux protéines transférées sur la membrane. Un rinçage avec une lotion de lavage spécifique est utilisé pour éliminer les anticorps qui ne sont pas fixés à la protéine. 

 

REVELATION

Des anticorps secondaires spécifiques aux protéines de l'infection sont alors ajoutés. Ces anticorps sont couplés à une enzyme ou à un fluorophore permettant de produire une réaction colorée ou luminescente qui sera révélatrice d'une infection. 

 

Résumé : Des protéines spécifiques sont déposées sur une membrane

• Si les anticorps primaire du sérum ne s'attachent pas à ces protéines, cela indique l'absence d'infection ;
• Si les anticorps primaire se lient aux protéines, cela déclenche une liaison avec les anticorps secondaire, révélant ainsi la présence de l'infection.